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液相色譜柱堵塞判斷

更新更新時(shí)間:2021-08-09

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         液相色譜柱堵塞判斷

                                                     上海連橋生物科技有限公司

1、色譜柱"的表現(xiàn)

"的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高,直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端,最主要原因就是流動(dòng)相里有雜質(zhì),雜質(zhì)的主要來(lái)源就是細(xì)菌。

2、色譜柱"的原因分析

原因1:配制流動(dòng)相時(shí)細(xì)菌污染

首先我們要認(rèn)識(shí)到,一般的國(guó)產(chǎn)甲醇其實(shí)不需要額外過(guò)濾處理,直接使用沒(méi)有問(wèn)題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì),也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過(guò)濾頭上排除,真正容易引起問(wèn)題的,是水中的細(xì)菌。

新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會(huì)長(zhǎng)菌,而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見(jiàn),卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙,造成柱子很快報(bào)廢。這就是在配制流動(dòng)相時(shí)造成的細(xì)菌污染的原因,解決它的方法很簡(jiǎn)單,就是確保水的可靠性。

這里有兩種方式推薦:

1)zuili想的方式當(dāng)然是購(gòu)買實(shí)驗(yàn)室專用純水機(jī),既方便又可靠,質(zhì)量也放心。唯yi的缺點(diǎn)就是價(jià)格不菲。

2) 成箱購(gòu)買市售品牌純凈水,這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。先隨機(jī)抽取一支做一下細(xì)菌平板實(shí)驗(yàn),待菌落數(shù)合格方可使用。

這里特別指出一個(gè)細(xì)節(jié):在絕大多數(shù)書本上,凡談到配制流動(dòng)相都會(huì)談到最后有一個(gè)過(guò)濾的步驟。但是從我們長(zhǎng)期使用的實(shí)際效果來(lái)說(shuō),只要能保證水的質(zhì)量,這一步*可以也應(yīng)當(dāng)去除。原因有以下三點(diǎn):

  1. 流動(dòng)相過(guò)濾在理論上有好處,但是實(shí)際操作時(shí)由于不可能做到專瓶專用,反而容易造成的交叉污染,對(duì)于配比復(fù)雜的流動(dòng)相影響更大。

2)流動(dòng)相過(guò)濾在經(jīng)濟(jì)成本上不劃算。買一套過(guò)濾裝置要6000多元,且過(guò)濾器*是比較容易損壞的設(shè)備。最主要是過(guò)濾片的成本太高,一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計(jì)算,過(guò)濾片的成本會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。

3)流動(dòng)相過(guò)濾對(duì)于工作效率成本不劃算。使用溶劑過(guò)濾器有一個(gè)預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗,晾干的過(guò)程,至少也有一個(gè)小時(shí)的時(shí)間。這個(gè)成本也不能忽視。

4)在實(shí)際工作未發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相不過(guò)濾會(huì)對(duì)柱壽命有任何影響。我們起碼有6 年時(shí)間沒(méi)有做過(guò)流動(dòng)相過(guò)濾的工作,但是和國(guó)內(nèi)同行相比較,在同等使用強(qiáng)度下我們的柱壽命是比較長(zhǎng)的。

原因2:使用流動(dòng)相時(shí)的細(xì)菌污染

流動(dòng)相剛開始沒(méi)有長(zhǎng)菌,在使用時(shí)卻產(chǎn)生了細(xì)菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時(shí)的一種不良使用習(xí)慣造成的。舉zuijian單的例子:50%的甲醇水流動(dòng)相,有兩種使用方式。一種方式是在上機(jī)前就配好混合在一起,另一種方式是在流路A放純甲醇,流路B放純水。

從單純實(shí)驗(yàn)效果來(lái)說(shuō),后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn):首先是簡(jiǎn)單,不需要實(shí)驗(yàn)者另個(gè)計(jì)算配比混合,其次就是比例準(zhǔn)確,能得到保留時(shí)間重復(fù)性jihao的實(shí)驗(yàn)效果。

但是,它有一個(gè)致命的缺陷,就是純水在流動(dòng)相瓶中幾天時(shí)間就會(huì)長(zhǎng)細(xì)菌(很多情況下不僅僅用純水作流動(dòng)相,而是用緩沖鹽溶液,本身就是優(yōu)質(zhì)肥料,細(xì)菌長(zhǎng)得更迅速),一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實(shí)驗(yàn)都要用新制備的純水,更要求在每次實(shí)驗(yàn)后把水相換掉,換成甲醇沖洗干凈,這一點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識(shí)不強(qiáng),就是意識(shí)到了但多次使用中總有一兩次會(huì)遺漏,但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因?yàn)橐合嗌V柱的堵塞是不可逆的。

所以,寧可犧牲小小的保留時(shí)間的重復(fù)性,也不要用純水溶液作為流動(dòng)相的一組。從實(shí)際實(shí)驗(yàn)效果來(lái)說(shuō),我建議用10%的甲醇水代替純水溶液,這樣可以有效排除長(zhǎng)細(xì)菌的隱患,既可作流動(dòng)相,也可沖柱。就算是在配制流動(dòng)相時(shí)會(huì)計(jì)算得麻煩一些,但是一次麻煩,終身受益。

原因3:不適當(dāng)操作

常見(jiàn)問(wèn)題的有以下幾種:

1)在更換零件時(shí)選擇的型號(hào)有誤,接口不是很匹配,在擰緊的時(shí)候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。

2)樣品處理液凈化得不干凈,長(zhǎng)期會(huì)在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。

3)在使用手動(dòng)六通閥時(shí),有些人可能由于手勁小的原因,轉(zhuǎn)動(dòng)的不到位,于是造成流路形成了死堵,壓力快速升高超過(guò)警戒值。

4)在使用金屬管路作出廢液管時(shí),應(yīng)當(dāng)注意最好廢液瓶中先放一些水,并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實(shí)驗(yàn)使用較高濃度的緩沖鹽溶液,在停機(jī)時(shí)可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見(jiàn),但卻的確發(fā)生過(guò)。

"的原因講了不少,現(xiàn)介紹查堵的方法。

3、查堵的方法及處理措施

在發(fā)生"的現(xiàn)象后,就需要找出原因,主要是什么位置發(fā)生了"。注意,絕大多數(shù)情況下,整個(gè)系統(tǒng)只會(huì)有一個(gè)地方發(fā)生堵塞。

查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開,仔細(xì)觀察壓力數(shù)值,如果某一個(gè)部件(柱子除外)裝上和拆下時(shí)的壓力差別很大,可發(fā)展變化判斷。至于柱的堵塞,可以通過(guò)換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來(lái)判斷。具體檢測(cè)步驟:

1)首先斷開真空泵的入口處,此時(shí)PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過(guò)濾頭堵塞。處理方法:用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí),在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過(guò)濾頭正常,在檢查;

2)打開沖洗閥(purge閥),使流動(dòng)相不經(jīng)過(guò)柱子,如果壓力沒(méi)有明顯下降,則是過(guò)濾白頭堵塞。處理方法:將過(guò)濾白頭取出,用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)。如果壓力降至100PSI 6.7 Bar)以下,過(guò)濾白頭正常,在檢查;

3)把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。處理方法:如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞,則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)的流動(dòng)相沖至壓力正常。假如按上面的方法長(zhǎng)時(shí)間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上,用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí),如果柱壓仍不下降,只有換柱子入口篩板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以盡量少用。

                                       本篇轉(zhuǎn)至實(shí)驗(yàn)之家


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