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液質(zhì)聯(lián)用離子源 ,質(zhì)量分析器種類,單四極和三重四極比較

更新更新時間:2021-08-09

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液質(zhì)聯(lián)用離子源 ,質(zhì)量分析器種類,單四極和三重四極比較

                 上海連橋生物科技有限公司


液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)一般用來對不揮發(fā)性化合物,極性化合物,熱不穩(wěn)定化合物,大分子量化合物(包括蛋白、多肽、多聚物等)進行分析測定,其離子源種類比較多,今天主要來看下大氣壓電噴霧電離ESI、大氣壓化學電離APCI、大氣壓光電離APP

ESI 為電噴霧,即樣品先帶電再噴霧,帶電液滴在去溶劑化過程中形成樣品離子,從而被檢測,對于極性大的樣品效果好一些;電噴霧電離源是一種軟電離方式,即便是分子量大,穩(wěn)定性差的化合物,也不會在電離過程中發(fā)生分解,它適合于分析極性強的大分子有機化合物,如蛋白質(zhì)、肽、糖等。電噴霧電離源的最大特點是容易形成多電荷離子。這樣,一個分子量為10000Da的分子若帶有10個電荷,則其質(zhì)荷比只有1000Da,進入了一般質(zhì)譜儀可以分析的范圍之內(nèi)。根據(jù)這一特點,目前采用電噴霧電離,可以測量分子量在300000Da以上的蛋白質(zhì)。

APCI 為大氣壓力化學電離源,樣品先形成霧,然后電暈放電針對其放電,在高壓電弧中,樣品被電離,然后去溶劑化形成離子,最后檢測,對極性小的樣品效果較好。大氣壓化學電離源主要用來分析中等極性的化合物。有些分析物由于結(jié)構(gòu)和極性方面的原因,用ESI不能產(chǎn)生足夠強的離子,可以采用APCI方式增加離子產(chǎn)率,可以認為APCIESI的補充。APCI主要產(chǎn)生的是單電荷離子,所以分析的化合物分子量一般小于1000Da。用這種電離源得到的質(zhì)譜很少有碎片離子,主要是準分子離子。


大氣壓光電離源,適用于弱極性的化合物,如多環(huán)芳烴等


ESI 的軟電離程度較APCI 的還小,但其應(yīng)用范圍較APCI 的大,只有少部分ESI 做不出,可以用APCI 輔助解決問題,但是APCI還是不能解決所有ESI 解決不了的問題,一般用ESI APPI 搭配使用比 ESI APCI 的應(yīng)用范圍更廣一些。


APCIESI源都能分析許多樣品,而且靈敏度相似,很難說出哪一種更合適。同時至今沒有一個確切的準則判斷何時使用某一種電離方式更好。但是通常認為電噴霧有利于分析生物大分子及其它分子量大的化合物,而APCI更適合于分析極性較小的化合物。

ESIAPCI共同點

1、使用高電壓元件和霧化氣噴霧法產(chǎn)生離子


2、通常產(chǎn)生(M+H)+(M-H)-等準分子離子


3、產(chǎn)生極少的碎片,但可以控制產(chǎn)生結(jié)構(gòu)碎片


  1. 非常靈敏的電離技術(shù)。

不同點:


1、生成離子的方式不同,ESI:液相離子化;APCI:氣相離子化

2、樣品兼容性

ESI:極性化合物和生物大分子

APCI:非極性,小分子化合物(相對ESI而言)且有一定揮發(fā)性

ESI的適用范圍要遠遠大于APCI

APCI缺點

1.有限的結(jié)構(gòu)信息

2.易發(fā)生熱裂解

3.低質(zhì)量時化學噪聲大

4.不適合做分子量大于1000的化合物


質(zhì)量分析器的功能是將離子源產(chǎn)生的離子,按照其質(zhì)荷比m/z進行分離、檢測,得到化合物特征的質(zhì)量信息。其中四級桿是zui常yong的質(zhì)量分析器。四級桿又主要有單四極和三重四極兩種


單四級

四極桿質(zhì)量分析器是由四根嚴格平行并與中心軸等間隔的圓柱形或者雙曲面柱狀電極構(gòu)成的正、負兩組電極,其上施加直流(DC)和射頻(RF)電壓,產(chǎn)生一個動態(tài)電場即四極場。 離子在四極場的運動軌跡由馬修(Mathieu)方程解束確定.滿足方程穩(wěn)定解的即有穩(wěn)定振蕩的離子能通過四極場。精確地控制四極電壓變化,使定質(zhì)荷比(mz)的離子通過正、負電極形成的動態(tài)電場到達檢測器,對于電壓變化的每一個瞬間,只有一種質(zhì)荷比的離子能夠通過,其質(zhì)荷比正比于射頻電壓RF的振幅,m/z=[k’/Ω2r2]V,所以質(zhì)量分析器也被稱為質(zhì)量過濾器。        

四極桿質(zhì)量分析器的質(zhì)量掃描范圍可以達到1 200amu掃描速度可以達到12 500 amu/s。結(jié)構(gòu)上有圓柱形和雙曲面之分,其中雙曲面結(jié)構(gòu)的四極桿能夠產(chǎn)生*符合理論設(shè)計的四極場。四極桿的材質(zhì)多為金屬鉬,也有石英鍍金的四極桿。

金屬鉬材質(zhì)的設(shè)計一般無需加熱,而石英鍍金的四級桿則需加熱, 這主要是有材質(zhì)之間的熱膨脹系數(shù)決定的。

                       三重四級

三重四極桿質(zhì)量分析器是將三組多極桿串聯(lián)起來,第一根和第三根四極桿是質(zhì)量分析器,通常稱為MSlMS2;中間的一根多極桿是碰撞反應(yīng)池,通常采用六極桿的設(shè)計。

  SIM模式大幅度提高了單四極桿質(zhì)譜的靈敏度,但是由于SIM的方法并不能完quan解jue干擾的問題,靈敏度受到一定程度的限制。三重四極桿質(zhì)量分析器就是專門為了這一目的而設(shè)計的。

三重四極桿質(zhì)量分析器具有多種數(shù)據(jù)采集方式,除了單四極桿具有的ScanSIM模式外,三重四極桿質(zhì)量分析器還可以進行產(chǎn)物離子掃描(Product Ion Scan)、多反應(yīng)離子監(jiān)測(Multiple Reaction Monitoring,MRM)、母離子掃描(Precursor Ion Scan)、中性丟失掃描(Neutral Loss Scan)

  由于三重四極產(chǎn)生的碎片離子特異性較強,較單四極的非特異性碎片離子,定性能力更強。

                 質(zhì)量分析器種類

液質(zhì)聯(lián)用在使用中經(jīng)常會用到的質(zhì)量分析器有四級桿,飛行時間和離子肼,那么我們來看下每種質(zhì)量分析器的應(yīng)用。

                 應(yīng)用領(lǐng)域

四級桿分析器較多的應(yīng)用于藥物分析,要進行定性定量的分析。飛行時間質(zhì)量分析器和離子肼主要是應(yīng)用于代謝領(lǐng)域研究,以定性為主,定量次之。

原理

1、四級桿分析器主要由四根棒狀電極組成,一般使用的是金屬鉬材質(zhì),通過射頻電源改變電壓來篩選離子,電場遵循馬紹爾方程。

2、飛行時間質(zhì)量分析器無需電場或磁場,通過離子漂移管,給離子以加速電壓,通過離子的飛行時間來確定離子荷質(zhì)比,飛行時間與離子質(zhì)量平方根成正比,在所加電壓能量相同的情況下,離子質(zhì)量越大則到達檢測器所需時間就越長;

3、離子肼主體是由一個環(huán)電極加上下兩個蓋電極組成的,也遵循馬紹爾方程。質(zhì)量掃描方式與四級桿類似,在恒定的直流電壓和射頻電壓的比值下,改變射頻電壓來獲取質(zhì)譜。

優(yōu)勢

TOF:給出的分子量比較準確,對大分子有優(yōu)勢;主要用于定性、也可以用于定量,但靈敏度沒有三重四*。

離子阱:優(yōu)勢也在定性,尤其對可能未知物的確認,如合成后的產(chǎn)物及雜質(zhì)、體內(nèi)的可能代謝產(chǎn)物。同TOF一樣,主要用于定性、也可以用于定量,但靈敏度就沒有三重四*,分子量范圍較三重四極窄。它較TOF的最大特點:可以對離子進行進一步的碎裂,以便確定其官能團、結(jié)構(gòu)等。


三重四極:優(yōu)勢是定量,靈敏度高、選擇性佳,同時也可做一些物質(zhì)定性。


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