一、高壓輸液系統(tǒng)

　　高壓輸液系統(tǒng)除了主要部件高壓泵之外，還包括一些輔助的裝置，如流動(dòng)相貯液槽、脫氣裝置、梯度洗脫(gradient elution)裝置等。為了除去流動(dòng)相中溶解的氣體(O2和N2)，貯液槽通常帶有使用真空泵的脫氣裝置。梯度洗脫裝置的作用是讓流動(dòng)相的組成隨時(shí)間而改變，以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性、離子強(qiáng)度或pH值，使試樣組分的相對(duì)保留值得以改變，從而提高分離效率。梯度洗脫有兩種方式：一種稱低壓梯度，指常壓下溶劑按一定比例混合后再由高壓泵輸入色譜柱，又稱外梯度；另一種稱高壓梯度，指先用高壓泵將各溶劑輸入混合器混合，再送人色譜柱，也稱為內(nèi)梯度。

　　高壓泵的輸出壓力一般在150～500kg／cm2。(1kg／cm2=98．0665kPa)，流速在0.01～10m1／min。對(duì)高壓泵的要求是流速恒定，無(wú)脈動(dòng)，流量可以調(diào)節(jié)。常用的高壓泵有往復(fù)泵，柱塞往復(fù)運(yùn)動(dòng)，由單向閥控制吸液、排液，輸出液體壓力和流速具有一定脈沖，一般采用雙泵或多泵系統(tǒng)，并加阻尼裝置，以提高輸出壓力和流速的穩(wěn)定性。此外柱塞泵往復(fù)運(yùn)動(dòng)頻率高，對(duì)泵的密封、結(jié)構(gòu)、材料、加工等都有特殊要求。

　　二、進(jìn)樣系統(tǒng)

　　進(jìn)樣系統(tǒng)是將待分析樣品引入色譜柱的裝置。進(jìn)樣裝置需滿足重復(fù)性好、死體積小、在柱的中心進(jìn)樣、進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜柱系統(tǒng)流量波動(dòng)要小，便于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等多項(xiàng)要求。進(jìn)樣系統(tǒng)包括取樣、進(jìn)樣兩種功能，實(shí)現(xiàn)這兩個(gè)功能又有手動(dòng)和自動(dòng)兩種方式。

　　1．注射器進(jìn)樣裝置

　　注射器進(jìn)樣裝置是指使用注射器，刺穿彈性隔膜后柱頭直接進(jìn)樣；這種進(jìn)樣方式適用于較低壓力，在現(xiàn)代HPLC操作中已不用。

　　2．閥進(jìn)樣裝置

　　閥進(jìn)樣裝置適用于高壓進(jìn)樣。閥進(jìn)樣裝置由高壓六通閥和固定體積的定量管組成。閥體用不銹鋼制成，內(nèi)壁精密加工，旋轉(zhuǎn)密封部分由既耐磨又具有良好的密封性能的鋁合金陶瓷材料或聚四氟乙烯制作。進(jìn)樣時(shí)在定量管里充滿試樣，然后通過(guò)切換閥進(jìn)樣。進(jìn)樣量大小可通過(guò)選擇不同體積(1～103μl)定量管來(lái)改變。

　　3．自動(dòng)進(jìn)樣器

　　自動(dòng)進(jìn)樣器在程序控制器或微機(jī)控制下可自動(dòng)完成取樣、進(jìn)樣、清洗等一系列操作，操作中需將樣品按順序裝入貯樣裝置即可。

　　4．進(jìn)樣技術(shù)對(duì)峰擴(kuò)展的影響

　　進(jìn)樣技術(shù)對(duì)峰擴(kuò)展的影響包括進(jìn)樣體積、進(jìn)樣時(shí)間、樣品濃度、選用的進(jìn)樣裝置、進(jìn)樣方式和進(jìn)樣位置。進(jìn)樣體積過(guò)大會(huì)使柱效下降，峰形變寬。進(jìn)樣時(shí)間越短越好。但較難控制。樣品濃度易使柱頭瞬間飽和，造成譜峰嚴(yán)重展寬，分離度下降。柱頭超載不僅與固定相有關(guān)，而且與溶質(zhì)及溶劑的性質(zhì)有關(guān)。一般認(rèn)為，在柱容量范圍內(nèi)，注入較大體積稀溶液優(yōu)于較小體積的濃溶液，即樣品濃度對(duì)譜峰展寬的影響比樣品體積更為重要。

　　由于HPLC柱要比氣相色譜柱短得多，所以因進(jìn)樣系統(tǒng)和檢測(cè)器中存在的死體積所引起譜峰展寬的影響要大得多。為了克服柱頭展寬，HPLC法對(duì)進(jìn)樣要求較為嚴(yán)格。無(wú)論哪一種進(jìn)樣，都要求做到準(zhǔn)確進(jìn)樣、重現(xiàn)性好。

　　色譜柱是液相色譜儀的核心部件。柱效高、選擇性好、分析速度快是對(duì)色譜柱的一般要求。分析用的色譜柱長(zhǎng)一般為lO～50cm，內(nèi)徑為2—5mm，制備用的色譜柱內(nèi)徑可達(dá)25mm。用不銹鋼或硬質(zhì)玻璃制成直形柱管，使用玻璃柱要注意它的耐壓強(qiáng)度。色譜柱的兩端裝有燒結(jié)不銹鋼或多孔聚四氟乙烯過(guò)濾片。在色譜柱前通常還配有前置柱，柱內(nèi)的填充物和分析柱相同，但粒度較大，其目的是除去流動(dòng)相中的雜質(zhì)，以避免分析柱被沾污；同時(shí)又可使流動(dòng)相預(yù)先被前置柱中的固定液所飽和，以減少流動(dòng)相在流過(guò)分析柱時(shí)洗脫其中的固定液，起到防止固定液流失的作用。

　　由于柱技術(shù)的發(fā)展，內(nèi)徑小于2mm的色譜柱應(yīng)用已經(jīng)越來(lái)越多，微徑小柱的發(fā)展又促進(jìn)了色譜儀器向更高壓力、更加快速的方向發(fā)展。因?yàn)橛糜谖叫≈墓潭ㄏ囝w粒與常規(guī)HPLC柱的固定相顆粒相比要細(xì)而均勻得多，這對(duì)液相色譜儀器的各個(gè)方面提出了更高的要求，從而產(chǎn)生各種超高壓的液相色譜儀器，如waters公司的UPLC和Agilent公司的超高壓HPLC儀器。

　　檢測(cè)系統(tǒng)

　　HPLC儀對(duì)檢測(cè)器的要求與氣相色譜儀*相同，其中主要是死體積要小、噪聲要小、基線要穩(wěn)、靈敏度要高。

　　l.HPLC檢測(cè)器的分類

　　常用的檢測(cè)器一般分為兩類：通用型檢測(cè)器和型檢測(cè)器。

　　(1)通用型檢測(cè)器

　　通用型檢測(cè)器可連續(xù)測(cè)量色譜柱流出物的全部特性變化，通常采用差分測(cè)量法。這類檢測(cè)器有示差折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、介電常數(shù)檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器和近年來(lái)發(fā)展的磁光旋轉(zhuǎn)檢測(cè)器等。通用型檢測(cè)器適用范圍廣，但由于對(duì)流動(dòng)相有響應(yīng)，因此易受溫度變化、流動(dòng)相流速和組成變化的影響，噪聲和漂移都較大，靈敏度較低，一般不宜用于梯度洗脫。質(zhì)譜檢測(cè)器是較好的通用型檢測(cè)器，由于接口技術(shù)的改進(jìn)及其本身的特點(diǎn)，沒(méi)有普通的通用型檢測(cè)器的上述缺點(diǎn)。質(zhì)譜檢測(cè)器詳見(jiàn)HPLC／MS聯(lián)用技術(shù)介紹。

　　(2)型檢測(cè)器

　　型檢測(cè)器用以測(cè)量被分離樣品組分某種特性的變化。這類檢測(cè)器對(duì)樣品中組分的某種物理或化學(xué)變化敏感，而這一特性是流動(dòng)相所不具備的，或至少在操作條件下不示。這類檢測(cè)器包括紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、極譜檢測(cè)器、放射性檢測(cè)器等。

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